执业医师生物化学辅导

二、糖有氧氧化　　葡萄糖的有氧氧化包括四个阶段。 　　①糖酵解产生丙酮酸(2丙酮酸、 2ATP、2NADH) 　　②丙酮酸氧化脱羧生成乙酰CoA 2×(CO2、NADH) 　　③三羧酸循环 2×(2CO2、ATP、3NADH、FADH2) 　　④呼吸链氧化磷酸化 (NADH-----ATP) 　　三羧酸循环：乙酰CoA经一系列的氧化、脱羧，最终生成CO2、H2O、并释放能量的过程，又称柠檬酸循环、Krebs循环。 　　原核生物：①~④阶段在胞质中 　　真核生物：①在胞质中，②~④在线粒体中 　　1、丙酮酸脱羧生成乙酰CoA。此反应在真核细胞的线粒体基质中进行，这是连接糖酵解与TCA的中心环节。 　　1) 丙酮酸脱氢酶系：丙酮酸脱氢酶系是一个十分庞大的多酶体系，位于线粒体膜上，电镜下可见。 　　Eli丙酮酸脱氢酶复合体： 　　分子量：5×106，直径45nm，比核糖体稍大。 　　酶 辅酶 每个复合物亚基数 　　丙酮酸脱羧酶(E1) TPP 24 　　二氢硫辛酸转乙酰酶(E2) 硫辛酸 24 　　二氢硫辛酸脱氢酶(E3) FAD、NAD+ 12 　　此外，还需要CoA、Mg2+作为辅因子。这些肽链以非共价键结合在一起，在碱性条件下，复合体可以解离成相应的亚单位，在中性时又可以重组为复合体。所有丙酮酸氧化脱羧的中间物均紧密结合在复合体上，活性中间物可以从一个酶活性位置转到另一个酶活性位置，因此，多酶复合体有利于高效催化反应及调节酶在反应中的活性。 　　2) 反应步骤： 　　(1)丙酮酸脱羧形成羟乙基-TPP 　　(2)二氢硫辛酸乙酰转移酶(E2)使羟乙基氧化成乙酰基 　　(3)E2将乙酰基转给CoA，生成乙酰-CoA 　　(4)E3氧化E2上的还原型二氢硫辛酸 　　(5)E3还原NAD+生成NADH 　　3) 丙酮酸脱氢酶系的活性调节：从丙酮酸到乙酰CoA是代谢途径的分支点，此反应体系受到严密的调节控制，此酶系受两种机制调节。 　　(1)可逆磷酸化的共价调节： 　　丙酮酸脱氢酶激酶(EA)(可被ATP激活) 　　丙酮酸脱氢酶磷酸酶(EB) 　　磷酸化的丙酮酸脱氢酶(无活性) 　　去磷酸化的丙酮酸脱氢酶(有活性) 　　(2)别构调节：ATP、CoA、NADH是别构抑制剂。ATP抑制E1;CoA抑制E2;NADH抑制E3。 　　4) 能量变化：1分子丙酮酸生成1分子乙酰CoA，产生1分子NADH(3ATP)。 　　2、 三羧酸循环(TCA)的过程 　　TCA循环：每轮循环有2个C原子以乙酰CoA形式进入，有2个C原子完全氧化成CO2放出，分别发生4次氧化脱氢，共释放12ATP。 　　1) 反应步骤 　　(1)、 乙酰CoA+草酰乙酸→柠檬酸 　　柠檬酸合酶，TCA中第一个调节酶：受ATP、NADH、琥珀酰CoA、和长链脂肪酰CoA的抑制;受乙酰CoA、草酸乙酸激活。氟乙酰CoA可与草酰乙酸生成氟柠檬酸，抑制下一步反应的酶，据此，可以合成杀虫剂、灭鼠药。 　　(2)、 柠檬酸→异柠檬酸 　　由顺鸟头酸酶催化 　　(3)、 异柠檬酸氧化脱羧生成α-酮戊二酸和NADH 　　异柠檬酸脱氢酶，这是三羧酸循环中第一次氧化脱羧反应， TCA中第二个调节酶：Mg2+(Mn2+ )、NAD+和ADP可活化此酶，NADH和ATP可抑制此酶活性。细胞在高能状态：ATPADP、NADHNAD+比值高时，酶活性被抑制。线粒体内有二种异柠檬酸脱氢酶，一种以NAD+为电子受体，另一种以NADP+为受体。前者只在线粒体中，后者在线粒体和胞质中都有。 　　(4)、 α-酮戊二酸氧化脱羧生成琥珀酰CoA和NADH 　　α-酮戊二酸脱氢酶系，TCA循环中的第三个调节酶：受NADH、琥珀酰CoA、Ca2+、ATP、GTP抑制，α-酮戊二酸脱氢酶系为多酶复合体，与丙酮酸脱氢酶系相似(先脱羧，后脱氢) 　　(5)、 琥珀酰CoA生成琥珀酸和GTP 　　琥珀酰CoA合成酶(琥珀酸硫激酶)，这是TCA中唯一的底物水平磷酸化反应，直接生成GTP。在高等植物和细菌中，硫酯键水解释放出的自由能，可直接合成ATP。在哺乳动物中，先合成GTP，然后在核苷二磷酸激酶的作用下，GTP转化成ATP。 　　(6)、 琥珀酸脱氢生成延胡索酸(反丁烯二酸)和FADH 　　琥珀酸脱氢酶是TCA循环中唯一嵌入线粒体内膜的酶。丙二酸是琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制剂，可阻断三羧酸循环。 　　(7)、 延胡索酸水化生成L-苹果酸 　　延胡索酸酶具有立体异构特性，OH只加入延胡索酸双键的一侧，因此只形成L-型苹果酸。 　　(8)、 L-苹果酸脱氢生成草酰乙酸和NADH 　　L-苹果酸脱氢酶，平衡有利于逆反应，但生理条件下，反应产物草酰乙酸不断合成柠檬酸，其在细胞中浓度极低，少于10-6molL，使反应向右进行。 　　2) TCA循环小结 　　(1)、总反应式： 　　丙酮酸 + 4NAD+ + FAD + GDP → 4NADH + FADH2 + GTP + 3CO2 + H2O 　　乙酰CoA + 3NAD+ + FAD + GDP → 3NADH + FADH2 + GTP + 2CO2 + H2O 　　(2)、 一次底物水平的磷酸化、二次脱羧反应，三个调节位点，四次脱氢反应。 　　3个NADH、1个FADH2进入呼吸链 　　(3)、 三羧酸循环中碳骨架的不对称反应 　　同位素标记表明，乙酰CoA上的两个C原子在第一轮TCA上并没有被氧化。 　　被标记的羰基碳在第二轮TCA中脱去。在第三轮TCA中，两次脱羧，可除去最初甲基碳的50%，以后每循环一次，脱去余下甲基碳的50% 　　3) 一分子Glc彻底氧化产生的ATP数量(按NADH的PO=3,FADH2的为2来计算) 　　(在肝脏中) 　　反应 酶 ATP消耗 产生ATP方式 ATP数量 合计 　　糖 酵 解 已糖激酶 1 -1 8 　　磷酸果糖激酶 1 -1 　　磷酸甘油醛脱氢酶 NADH呼吸链氧化磷酸化 2×3 　　磷酸甘油酸激酶 底物水平磷酸化 2×1 　　丙酮酸激酶 底物水平磷酸化 2×1 　　TCA 丙酮酸脱氢酶复合物 NADH 2×3 30 　　异柠檬酸脱氢酶 NADH 2×3 　　α-酮戊二酸脱氢酶复合物 NADH 2×3 　　琥珀酸脱氢酶 FADH2 2×2 　　苹果酸脱氢酶 NADH 2×3 　　琥珀酰CoA合成酶 底物水平磷酸化 2×1 　　净产生：38ATP 　　在骨骼肌、脑细胞中，净产生：36ATP 　　甘油磷酸穿梭，1个NADH生成2个ATP 　　苹果酸穿梭，1个NADH生成3个ATP 　　(1)、 磷酸甘油穿梭机制： 　　磷酸二羟丙酮+NADH+H+→3-磷酸甘油+NAD+ 　　3-磷酸甘油进入线粒体，将2H交给FAD而生成FADH2，FADH2可传递给辅酶Q，进入呼吸链，产生2ATP(3-磷酸甘油脱氢酶的辅酶是FAD)。 　　(2)、 苹果酸穿梭机制： 　　胞液中NADH可经苹果酸酶催化，使草酰乙酸还原成苹果酸，再通过苹果酸-α-酮戊二酸载体转运，进入线粒体，由线粒体内苹果酸脱氢酶催化，生成NADH和草酰乙酸，NADH进入呼吸链氧化，生成3ATP。(苹果酸脱氢酶的辅酶是NAD+) 　　1分子Glc在肝、心中完全氧化，产生38ATP，在骨骼肌、神经系统组织中，产生36ATP。 　　4) 三羧酸循环的代谢调节 　　(1)、 柠檬酸合酶(限速酶)：受ATP、NADH、琥珀酰CoA及脂酰CoA抑制。 　　受乙酰CoA、草酰乙酸激活 　　(2)、 异柠檬酸脱氢酶：NADH、ATP可抑制此酶，ADP可活化此酶，当缺乏ADP时就失去活性。 　　(3)、 α-酮戊二酸脱氢酶：受NADH和琥珀酰CoA抑制。 　　5) TCA的生物学意义 　　(1) 氧化提供能量。线粒体外的NADH，可通过3-磷酸甘油穿梭和苹果酸穿梭机制，运到线粒体内，经呼吸链再氧化，这两种机制在不同组织的细胞中起作用。 　　(2) TCA是生物体内其它有机物氧化的主要途径，如脂肪、氨基酸、糖 　　(3) TCA是物质代谢的枢纽。一方面，TCA是糖、脂肪、氨基酸等彻底氧化分解的共同途径;另一方面，循环中生成的草酰乙酸、α-酮戊二酸、柠檬酸、琥珀酰CoA和延胡索酸等又是合成糖、氨基酸、脂肪酸、卟啉等的原料，因而TCA将各种有机物的代谢联系起来。TCA是联系体内三大物质代谢的中心环节，为合成其它物质提供C架。 　　6) TCA的回补反应 　　三羧酸循环中间物的的回补：在TCA循环中，有些中间产物是合成其它物质的前体，如卟啉的主要碳原子来自琥珀酰CoA，Glu、Asp可以从α-酮戊二酸和草酰乙酸衍生而成，一旦草酰乙酸浓度下降，则会影响TCA循环，因此这些中间产物必须不断补充，以维持TCA循环。 　　产生草酰乙酸的途径有三个： 　　(1)、 丙酮酸羧化酶催化丙酮酸生成草酰乙酸 　　丙酮酸羧化酶是一个调节酶，乙酰CoA可以增加其活性。需要生物素为辅酶 　　(2)、 磷酸烯醇式丙酮酸羧化激酶催化磷酸烯醇式丙酮酸转化成草酰乙酸 　　在脑、心脏中存在这个反应。 　　(3)、 Asp、Glu转氨可生成草酰乙酸和α-酮戊二酸 　　Ile、Val、Thr、Met也会形成琥珀酰CoA，最后生成草酰乙酸 　　附： 葡萄糖有氧氧化生成的ATP 　　反　　　应 辅酶 ATP 　　第一阶段 葡萄糖　6-磷酸葡萄糖 -1 　　6-磷酸果糖　1，6双磷酸果糖 -1 　　2*3-磷酸甘油醛　2*1,3-二磷酸甘油酸 NAD+ 2*3或2*2(详见) 　　2*1,3-二磷酸甘油酸　2*3-磷酸甘油酸 2*1 　　2*磷酸烯醇式丙酮酸　2*丙酮酸 2*1 　　第二阶段 2*丙酮酸　2*乙酰CoA NAD+ 2*3 　　第三阶段 2*异柠檬酸　2*α-酮戊二酸 NAD+ 2*3 　　2*α-酮戊二酸　2*琥珀酰CoA NAD+ 2*3 　　2*琥珀酰CoA　2*琥珀酸 2*1 　　2*琥珀酸　2*延胡索酸 FAD 2*2 　　2*苹果酸　2*草酰乙酸 NAD+ 2*3 　　净生成　　　38或36个ATP 　　3、磷酸戊糖途径 　　也称磷酸己糖支路，发生在胞质中。细胞内Glc的氧化分解，除通过糖酵解，三羧酸循环和发酵外，还能直接氧化分解。即反应开始，在G-6-P上的C2原子上直接氧化，通过一系列转化被分解，此为磷酸戊糖途径。 　　两个事实： 　　①用碘乙酸和氟化物抑制糖酵解(磷酸甘油醛脱氢酶)发现Glc的消耗并不因此而受影响，证明葡萄糖还有其它的分解途径 　　②用14C分别标记Glc的C1和C6，然后分别测定14CO2生成量，发现C1标记的Glc比C6标记的Glc更快、更多地生成14CO2 ，如果糖酵解是唯一的`代谢途径，那么14C1和14C2生成14CO2的速度应该相同。 　　1)、 反应过程 　　Glc经磷酸戊糖途径氧化分解可分为两个阶段。 　　第一阶段：6-磷酸葡萄糖氧化脱羧生成5-磷酸核糖 　　第二阶段：磷酸戊糖分子重排，产生不同碳链长度的磷酸单糖 　　(1) 6-磷酸葡萄糖脱氢脱羧生成5-磷酸核酮糖 　　在此氧化脱羧阶段中，Glc经两次脱氢，一次脱羧，生成5-磷酸核酮糖及NADPH。6-磷酸葡萄糖脱氢酶是磷酸戊糖途径的调控酶，NADPH反馈抑制此酶活性。 　　(2) 磷酸戊糖异构生成5-磷酸核糖及5-磷酸木酮糖 　　(表异构酶)5-磷酸木酮糖产率：23; (异构酶) 5-磷酸核糖产率：13 　　(3) 磷酸戊糖通过转酮、转醛反应生成酵解途径的中间产物(F-6-P，3-磷酸甘油醛) 　　 转酮反应：5-磷酸木酮糖将自身的二碳单位(羟乙酰基)转到5-磷酸核糖的C1上，生成3-磷酸甘油醛和7-磷酸景天庚酮糖。 　　转酮酶需TPP为辅酶，作用机理与丙酮酸脱氢酶中的TPP类似。 　　 转醛反应：转醛酶将7-磷酸庚酮糖上的三碳单位(二羟丙酮基)转到3-磷酸甘油醛的C1上，生成4-磷酸赤鲜糖和6-磷酸果糖。 　　(4)转酮反应(转酮酶) 　　4-磷酸赤鲜糖接受另一分子5-磷酸木酮糖上的二碳单位(羟乙酰基)，生成6-磷酸果糖和3-磷酸甘油醛

第十二章 蛋白质的生物合成　　蛋白质的生物合成过程，就是将DNA传递给mRNA的遗传信息，再具体地解译为蛋白质中氨基酸排列顺序的过程，这一过程被称为翻译(translation)。 　　一、蛋白质生物合成的条件。 　　生物体内的各种蛋白质都是生物体内利用约20种氨基酸为原料自行合成的。参与蛋白质生物合成的各种因素构成了蛋白质合成体系，该体系包括：① mRNA：作为蛋白质生物合成的模板，决定多肽链中氨基酸的排列顺序;② tRNA：搬运氨基酸的工具;③ 核糖体(又名核蛋白体)：蛋白体生物合成的场所;④ 酶及其他蛋白质因子;⑤ 供能物质及无机离子。　　(一)mRNA：　　作为指导蛋白质生物合成的模板。mRNA中每三个相邻的核苷酸组成三联体，代表一个氨基酸的信息，此三联体就称为密码(coden)。共有64种不同的密码，即4×4×4=64。　　遗传密码具有以下特点：① 连续性;② 简并性;③ 通用性;(但在线粒体或叶绿体中特殊)④ 方向性，即解读方向为5′→ 3′;⑤ 摆动性;⑥ 起始密码：AUG;终止密码：UAA、UAG、UGA。　　(二)tRNA：　　在氨酰-tRNA合成酶催化下，特定的tRNA可与相应的 氨基酸结合，生成氨酰-tRNA，从而携带氨基酸参与蛋白质的生物合成。　　tRNA反密码环中部的三个核苷酸构成三联体，可以识别mRNA上相应的密码，此三联体就称为反密码子(anticoden)。　　反密码对密码的识别，通常也是根据碱基互补原则，即A—U，G—C配对。但反密码的第一个核苷酸与第三核苷酸之间的配对，并不严格遵循碱基互补原则。如反密码第一个核苷酸为Ⅰ(次黄嘌呤)，则可与A、U或C配对，如为U，则可与A或G配对，这种配对称为不稳定配对。　　能够识别mRNA中5′端起动密码AUG的tRNA是一种特殊的tRNA，称为起动tRNA。在原核生物中，起动tRNA是一种携带甲酰蛋氨酸的tRNA，即tRNAifmet;而在真核生物中，起动tRNA是一种携带蛋氨酸的tRNA，即tRNAimet。　　在原核生物和真核生物中，均存在另一种携带蛋氨酸的tRNA，识别非起动部位的蛋氨酸密码，AUG。　　(三)rRNA和核糖体：　　原核生物中的核糖体大小为70S，可分为30S小亚基和50S大亚基。小亚基由16SrRNA和21种蛋白质构成，大亚基由5SrRNA，23SRNA和35种蛋白质构成。　　真核生物中的核糖体大小为80S，也分为40S小亚基和60S大亚基。小亚基由18SrRNA和30多种蛋白质构成，大亚基则由5S rRNA，28S rRNA和50多种蛋白质构成，在哺乳动物中还含有8 S rRNA。　　核糖体的大、小亚基分别有不同的功能：　　小亚基：可与mRNA、GTP和起动tRNA结合。　　大亚基：　　(1)具有两个不同的tRNA结合点。A位(右)—— 受位或氨酰基位，可与新进入的氨基酰tRNA结合;P位(左)——给位或肽酰基位，可与延伸中的肽酰基tRNA结合。　　(2)具有转肽酶活性：将给位上的肽酰基转移给受位上的氨基酰tRNA，形成肽键。　　(3)具有GTPase活性，水解GTP，获得能量。　　(4)具有起动因子、延长因子及释放因子的结合部位。　　在蛋白质生物合成过程中，常常由若干核糖体结合在同一mRNA分子上，同时进行翻译，但每两个相邻核蛋白之间存在一定的间隔，形成念球状结构。由若干核糖体结合在一条mRNA上同时进行多肽链的翻译所形成的念球状结构称为多核糖体。　　(四)起动因子(IF)　　这是一些与多肽链合成起动有关的蛋白因子。原核生物中存在3种起动因子，分别称为IF1-3。在真核生物中存在9种起动因子(eIF)。其作用主要是促进核糖体小亚基与起动tRNA及模板mRNA结合。　　(五)延长因子(EF)　　这是一些与多肽链合成延伸有关的蛋白因子。原核生物中存在3种延长因子(EFTU，EFTS，EFG)，真核生物中存在2种(EF1，EF2)。其作用主要促使氨基酰tRNA进入核糖体的受体，并可促进移位过程。　　(六)释放因子(RF)　　这是一些与多肽链合成终止有关的蛋白因子。原核生物中有4种，在真核生物中只有1种。其主要作用是识别终止密码，协助多肽链的释放。　　(七)氨酰-tRNA合成酶　　该酶存在于胞液中，与特异氨基酸的活化以及氨基酰tRNA的合成有关。　　每种氨酰-tRNA合成酶对相应氨基酸以及携带氨基酸的数种tRNA具有高度特异性，这是保证tRNA能够携带正确的氨基酸对号入座的必要条件。　　目前认为，该酶对tRNA的识别，是因为在tRNA的氨基酸臂上存在特定的识别密码，即第二套遗传密码。　　(八)供能物质和无机离子　　多肽链合成时，需ATP、GTP作为供能物质，并需Mg2+、K+参与。　　氨基酸活化时需消耗2分子高能磷酸键，肽键形成时又消耗2分子高能磷酸键，故缩合一分子氨基酸残基需消耗4分子高能磷酸键。 　　二、蛋白质生物合成的过程 　　蛋白质生物合成过程包括三大步骤：①氨基酸的活化与搬运;②活化氨基酸在核糖体上的缩合;③多肽链合成后的加工修饰。　　(一)氨基酸的活化与搬运　　氨基酸的活化以及活化氨基酸与tRNA的结合，均由氨酰-tRNA合成酶催化完成。　　在此反应中，特异的tRNA3’端CCA上的2’或3’位自由羟基与相应的活化氨基酸以酯键相连接，形成氨酰-tRNA，从而使活化氨基酸能够被搬运至核糖体上参与多肽链的合成。氨酰-tRNA的合成，可使氨基酸 ①活化;②搬运;③定位。

掌握概念，在生物化学中这也是需要掌握的内容，例如：酶是蛋白质这种概念，也会是考试中易得分的部分。注意重点章节的细节，如糖的代谢、三羧酸循环中的关键步骤，哪一步是可逆的，哪一步是不可逆的，各代谢途径的关键酶及生理意义；各代谢途径的主要调节环节及相互联系等细节问题。在学习的时候不要只听冲刺班的课程，因为它并不是基础班课程的代替品，也不能覆盖所有的考试内容，因此还是建议听一听基础班课程。“宝剑锋从磨砺出，梅花香自苦寒来。”每个成功者靠的都不只是运气，不要放弃任何科目，希望每个参加医学考试的学员都能够付出汗水，付出努力，收获自己的成功。